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檢測(cè)產(chǎn)品展示

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免疫親和柱

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嘔吐毒素

型號(hào)/規(guī)格:ZYD-OTDS
檢測(cè)項(xiàng)目:嘔吐毒素
產(chǎn)品用途:用于定性、定量檢測(cè)谷物、酒類等食品和飼料等樣本中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇時(shí)的樣品前處理。
產(chǎn)品關(guān)鍵詞:嘔吐毒素

產(chǎn)品詳情

嘔吐毒素免疫親和柱操作說明書

【概要】

脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol, DON) 又稱嘔吐毒素(vomitoxin),主要是由鐮刀菌的某些種產(chǎn)生的化學(xué)結(jié)構(gòu)和生物活性相似的有毒代謝產(chǎn)物——單端孢霉烯族化合物中的一種。廣泛存在于全球,主要污染小麥、大麥、玉米等谷類作物,也污染糧食制品,人和動(dòng)物在誤食被該毒素污染的糧谷類后可以產(chǎn)生廣泛的毒性效應(yīng)。DON最明顯的毒性作用是引起嘔吐、腹瀉、腹痛等癥,并延緩生長(zhǎng)、降低免疫機(jī)能,與貧血、免疫抑制、食管癌、克山病也具有密切聯(lián)系。給人、家畜的健康造成巨大威脅。

【適用范圍及性能】

用于定性、定量檢測(cè)谷物、酒類等食品和飼料等樣本中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇時(shí)的樣品前處理。

柱容量:≥500ng

回收率:≥80%

【試驗(yàn)原理】

本產(chǎn)品的測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng),脫氧雪腐鐮刀菌烯醇單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠上,樣品中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇經(jīng)過提取、過濾、稀釋,然后將樣品提取液緩慢的通過脫氧雪腐鐮刀菌烯醇免疫親和層析柱,在免疫親和柱內(nèi),脫氧雪腐鐮刀菌烯醇與抗體結(jié)合,之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結(jié)合的其他物質(zhì)。用甲醇洗脫脫氧雪腐鐮刀菌烯醇,然后注入到分析儀器中用于檢測(cè)。

【包裝組成】

根據(jù)不同規(guī)格,每一個(gè)盒中包含5/25支脫氧雪腐鐮刀菌烯醇免疫親和層析柱及1份說明書。

【需要而未提供的設(shè)備及試劑】

設(shè)備:

┅┅高速均質(zhì)器或組織勻漿機(jī)

┅┅粉碎機(jī)

┅┅200ml/50ml量筒

┅┅天平:感量0.1g

┅┅微量移液器:?jiǎn)蔚?100μl~1000μl

┅┅槽紋濾紙(折疊快速定性或定量濾紙)

┅┅玻璃微纖維濾紙(1.5μm孔徑)

┅┅50ml漏斗

┅┅一次性玻璃試管

┅┅泵流操作架(包括空氣泵,不同容積的玻璃注射器等)

試劑:

┅┅蒸餾水或去離子水

┅┅聚乙二醇(PEG)2000

┅┅色譜級(jí)甲醇

┅┅pH7.0磷酸鹽緩沖溶液(PBS):稱取8.0g氯化鈉,1.2g磷酸氫二鈉,0.2g磷酸二氫鉀,0.2g氯化鉀,用990mL純水溶解,然后用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.0,最后用純水稀釋至1000mL

【樣本處理步驟】

(一)花生,玉米,大米,小麥及其制品和飼料(稀釋倍數(shù)4)

┅┅稱取25g粉碎的樣品,加入10g聚乙二醇8000后,用去離子水定容;

┅┅轉(zhuǎn)移至均質(zhì)杯中,均質(zhì)器高速均質(zhì)2分鐘;

┅┅4000r/min離心5min或用定量濾紙過濾,取上清液,使用玻璃纖維濾紙過濾后待用;

┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取2mL上述樣品提取液注入玻璃注射器;

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/s流速緩慢通過免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過柱體;

┅┅以5.0mLPBS溶液和去離子水快速淋洗柱子1次,流速為2-3滴/秒。棄去全部流出液,并使2mL~3mL空氣通過柱體;

┅┅準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫,流速為1 滴/S,收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測(cè)用。

(二)酒類(稀釋倍數(shù)0.5)

┅┅取脫氣酒類試樣(含二氧化碳的酒類樣品使用前先置于4℃冰箱冷藏30min,過濾或超聲脫氣)或其他不含二氧化碳的

  酒類試樣20g(精確到0.01g),加人1g聚乙二醇(4.3),用水定容至25.0mL,混勻。

┅┅用玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄清

┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取2mL上述樣品提取液注入玻璃注射器;

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/s流速緩慢通過免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過柱體;

┅┅以5.0mLPBS溶液和去離子水快速淋洗柱子1次,流速為2-3滴/秒。棄去全部流出液,并使2mL~3mL空氣通過柱體;

┅┅準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫,流速為1 滴/S,收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測(cè)用。

【結(jié)果判定】

經(jīng)免疫親和柱凈化后,收集到的甲醇洗脫液可直接使用熒光計(jì)或者HPLC檢測(cè),也可使用薄層色譜或者酶聯(lián)免疫試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。也可氮?dú)獯蹈珊螅瑥?fù)溶以提升濃度(稀釋倍數(shù)相應(yīng)變化)。

【注意事項(xiàng)】

┅┅嘔吐毒素危害很大,應(yīng)戴手套操作。

┅┅不要使用過了有效日期的免疫親和柱。

【貯藏條件及保存期】

貯藏條件:親和柱可于常溫保存,2-8℃儲(chǔ)存可延長(zhǎng)有效期,不可凍存

保存期:該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。





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